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                nc膜和pvdf膜的區別

                發布時間:2022-05-24 09:27:08     來源:     點擊量:

                  1. 硝酸纖維素膜(NC膜)

                  硝酸纖維素膜是蛋白印跡最廣泛使用的轉移介質,對蛋白有很強的結合能力,而且適用于各種顯色方法,包括同位素,化學發光(Luminol類)、常規顯色、染色和熒光顯色;背景低,信噪比高。NC膜的使用也很簡便,比如不需要甲醛預處理,只要在無離子水面浸潤排出膜內氣泡,再在電泳緩沖液中平衡幾分鐘就可以了;比如NC膜很容易封閉,也不需要特別嚴謹的清洗條件。轉移到NC膜上的蛋白在合適的條件下可以穩定保存很長時間,不過要注意的是純的硝纖膜在比較脆,又容易卷,操作要小心,不適合用于需要多次重復清洗的用途——因為經不起多次“折磨”。選擇硝纖膜時要注意的是選擇合適的孔徑,通常20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔徑的膜,小于20KD的話建議選擇0.2um的,如果小于7KD的話最好選擇0.1um的膜。另外還要注意選擇純的NC膜——混有含醋酸纖維(CM)的NC膜結合力會有所降低。另外提醒一句:由于NC膜上結合的蛋白會因為一些去污劑而被代替,因此在封閉時最好使用較溫和的Tween20,而且濃度不要超過0.3%(據說0.05%效果最好)。

                  2. PVDF膜

                  PVDF膜比較貴,但是做WB的“殺手锏”。與硝酸纖維素膜相比,PVDF膜在蛋白質截留能力,機械強度和化學相容性上都更優越的性能(Pluskal,et al.,1986)。市售硝酸纖維素膜的典型結合量是80-100μg/cm2,而PVDF膜結合量是100-200μg/cm2(而結合強度PVDF比硝纖膜強6倍!)。但是PVDF膜最大的優點不僅于此:更好的機械強度和化學耐受性使PVDF膜在各種染色應用和多重免疫檢測中成為理想選擇;而且單個凝膠的泳道復本可用于多種目的,如考馬斯亮藍染色后切出條帶并進行N-末端測序、蛋白消化/肽分離/內部測序和免疫檢測(Kurien,et al.,2003)。特別是需要做N端蛋白測序,在相當“嚴酷”的清洗條件下,當尼龍或者硝纖膜已經降解的情況下PVDF膜依然保持本色,笑傲江湖。所以PVDF也是要做蛋白測序的唯一選擇。PVDF膜同樣分0.45um和0.2um的,后者孔徑小,對小分子蛋白有較好的攔截吸附,背景可能會比前者稍高。

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